Hayvan yetiştiriciliğinde bilgisayar destekli sperm analizi (CASA) sisteminin birincil uygulamalarından biri, donmuş – eritilmiş sperm dozlarının eritme sonrasındaki kalite değerlendirmesidir. Laboratuvarlar özellikle, satılacak dozların minimum kalite kontrol standartlarına uymasını sağlamak için eritme sonrası konsantrasyon, hareketlilik ve progresif hareketlilik için nesnel, standartlaştırılmış bir değerlendirme elde etmek isterler. Bununla birlikte, günümüzde kullanılan birçok kriyoprezervasyon sulandırıcısı, CASA sistemlerinin spermi düzgün bir şekilde tanımlama ve arka plandaki döküntülerden ayırt etme yeteneğini bozabilen yumurta sarısı veya süt gibi protein bazları içerir.
Doğru ve tekrarlanabilir konsantrasyon ve hareketlilik ölçümü gerekli olduğunda ve sulandırıcının net görüntüye engel olduğu durumlarda CASA teknolojisi, kullanıcıların tüm ihtiyaçlarını karşılamaktadır. IDENT sistemli IVOS II, doğru ve kesin bir analiz sağlamak için benzersiz bir çözüm sunar. DNA’ya özgü özel bir floresan boya (Hoechst 33342), flaşlı bir floresan ışık kaynağı ve IVOS II’ye entegre optiklerin kullanımıyla sistem; boyut, şekil ve yoğunluk gibi tipik sperm tanımlama özellikleri yerine, DNA’nın varlığına dayalı olarak sperm hücrelerini kalıntı ve döküntülerden ayırt ederek tanımlayabilir.
Hoechst 33342 ve şeffaf bir tampondan oluşan basit bir boyama prosedürü kullanılarak, boya sperm hücreleri ile inkübe edilir ve bu süre zarfında boya, sperm başının yüksek oranda yoğunlaştırılmış DNA’sında kolayca emilir. Bu boya daha sonra flaşlı, floresan (Xenon veya LED) bir ışık kaynağı kullanılarak uyarılır ve floresan filtreden bakıldığında kamera tarafından algılanan bir görüntü oluşur. Buna karşılık, ham ejakülatlarda veya kriyoprezervasyon ortamında bulunan çoğu kalıntı, yeterli DNA içermedikleri için boyayı ememez ve aynı uyarı seviyesinde floresan yayamazlar.
Bir flaşlı xenon veya LED floresan ışık kaynağının kullanılması, UV ışığına maruz kalmasını sınırlayarak spermanın üzerindeki fototoksik etkileri önemli ölçüde azaltır. Bu durum, floresan altında mutlak sayımlara ek olarak CASA’nın motilite analizi için de kullanılmasını mümkün kılar.
Yazan: Jennifer Ringwelski
Kaynak: https://www.imv-technologies.com